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槲皮素对百草枯染毒肺上皮细胞存活率和上皮间质转化标志的影响

         
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目的探讨槲皮素(Que)对百草枯(PQ)处理肺上皮细胞(MLE-12)的存活率和上皮间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影响及机制。方法采用CCK-8法分别检测不同剂量PQ (50、150、450μmol/L)对MLE-12细胞存活率的影响。实验设立空白对照组、阳性对照组、PQ(150μmol/L)+Que(30、60、90μmol/L)干预组、阴性对照组,在Que干预24 h后检测细胞存活率。应用荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测α-SMA、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达。结果经PQ(150μmol/L)处理后,60μmol/L和90μmol/L的Que能够显著提高MLE-12细胞存活率,与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR法和Western blot法检测结果表明,与空白对照组比较,50μmol/L的PQ能提高α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt、mTOR的mRNA表达,以及α-SMA、CTGF、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3、Akt的蛋白表达(P<0.05);150μmol/L的PQ能提高TGF-β1和mTOR的mRNA表达,以及α-SMA、E-Cadherin、TGF-β1、Smad3的蛋白表达(P<0.05);450μmol/L的PQ能提高CTGF和Smad3的mRNA表达,以及α-SMA、E-Cadherin、Smad3的蛋白表达(P<0.05)。在不同浓度Que干预PQ(150μmol/L)染毒的MLE-12细胞后,与阳性对照组相比,30μmol/L的Que能降低α-SMA、TGF-β1、Akt、mTOR的mRNA和蛋白表达水平,以及α-SMA、CTGF、Akt、mTOR的蛋白表达水平(P<0.05);60μmol/L的Que能提高CTGF、E-Cadherin、Smad3、Akt的mRNA表达水平,以及α-SMA、Smad3、mTOR的蛋白表达水平(P<0.05);90μmol/L的Que能降低TGF-β1、mTOR的mRNA表达水平,提高CTGF的mRNA表达水平,降低Akt、mTOR的蛋白表达水平(P<0.05)。结论百草枯染毒可能通过TGF-β1诱导细胞发生上皮间质转化。槲皮素干预能提高百草枯染毒MLE-12细胞的存活率,并能改变细胞上皮间质转化程度,其机制可能是通过调控TGF-β1/Smad和Akt/mTOR信号通路实现。

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