抗IL-33全人源scFv-Fc抗体的可溶性表达与鉴定

王栩; 袁青; 叶迎春; 于红; 徐文峰; 杨燕; 年四季

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抗IL-33全人源scFv-Fc抗体的可溶性表达与鉴定

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通过对通用型在细菌中可溶性表达scFv-Fc抗体载体的构建,对抗IL-33全人源scFv-Fc抗体进行可溶性表达并鉴定。扩增人IgG1Fc片段及前期筛选的抗IL-33单链抗体(scFv)DNA,分别插入到改建的载体pLZ16中,构建可溶性重组表达pLZ16-scFv-Fc质粒。将重组质粒转入E.coli DH5αF’,菌落经PCR和测序验证表明我们成功构建了pLZ16-scFv-Fc重组质粒。将阳性克隆子分别于32℃IPTG表达5h或25℃无IPTG表达50h,用HRP标记抗人IgG1Fc抗体进行检测,结果显示25℃无IPTG表达50h时,表达蛋白分泌在细菌周质间,可明显检测到scFv-Fc的可溶性表达;western blotting结果显示,25℃无IPTG表达的scFv-Fc为65kD左右,其可溶性表达量较32℃表达量高。本研究成功构建了pLZ16-scFv-Fc重组质粒,并在E.coli DH5αF’中成功可溶性表达抗IL-33全人源scFv-Fc抗体。

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来源
《现代免疫学》 |2016年第6期|462-465|共4页
作者
王栩; 袁青; 叶迎春; 于红; 徐文峰; 杨燕; 年四季;
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作者单位

西南医科大学基础医学院;

泸州646000;

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正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;
关键词
scFv-Fc; IL-33; 可溶性表达;

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