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金黄色葡萄球菌重组蛋白AtlG体外抗菌效应探讨

         

摘要

目的通过基因原核表达技术获取金黄色葡萄球菌(ATCC25923)自溶素片段AtlG重组蛋白,初步探讨其体外抗菌效应。方法根据GenBank中的atlG基因序列设计合成特异引物,采用PCR技术以金黄色葡萄球菌的基因组为模板扩增相应atlG基因序列;分别构建克隆载体PMD19-T-atlG和表达载体pET-32а(+)/atlG;构建的表达载体经由IPTG诱导后通过等电点洗脱技术获取纯化的重组蛋白AtlG;采用微量肉汤稀释法测定AtlG对金黄色葡萄球菌及其苯唑西林耐药株的最低抑菌浓度(MIC),动态测定金黄色葡萄球菌及其耐药株对AtlG的药物敏感性,初步探讨重组蛋白AtlG的体外抗菌活性。结果成功构建了原核表达载体pET-32а(+)/atlG,表达的重组蛋白AtlG对金黄色葡萄球菌标准株和苯唑西林耐药株的MIC分别为16μg/ml和64μg/ml;相比于未加药物的对照组,rAtlG对标准株作用1h后细菌数显著降低(P=0.045),抑菌效果持续到5h测定点(P=0.006);对苯唑西林耐药株作用3h后显示出抑菌效果(P=0.003),5h后与对照组相比差异无统计学意义。结论 50μg/ml的rAtlG对金黄色葡萄球菌标准株抑菌作用发生快、持续时间长,对苯唑西林耐药株也有一定的抑菌作用,具有作为抗菌药物的可能性。

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