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首页> 中文期刊> 《中国微生态学杂志》 >依地酸钠对黏液型铜绿假单胞菌生物膜的作用

依地酸钠对黏液型铜绿假单胞菌生物膜的作用

         
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目的探讨金属螯合剂依地酸钠(EDTA)对黏液型铜绿假单胞菌(PA)成熟生物膜的杀菌作用和对其结构的影响。方法平板法培养成熟铜绿假单胞菌生物膜,微量肉汤稀释法测量EDTA、环丙沙星的最低抑菌浓度,平板计数法计算EDTA、环丙沙星单独及联合对生物膜菌落数的影响,荧光探针FITC-ConA染细菌胞外多糖、荧光显微镜下观察EDTA作用前后多糖差别,荧光探针SYTO9/PI标记生物膜内细菌、激光共聚焦显微镜观察结合BF图像结构分析软件(ISA)对EDTA作用前后的生物膜结构参数进行定量分析。结果当EDTA浓度为5 MIC时达到对PA生物膜的最大杀菌效应,可使菌落数由107CFU/ml降至104CFU/ml,0.1 MIC、5 MIC的EDTA均可增强环丙沙星对生物膜的杀菌作用,高浓度组效果更明显、使菌落数降至102CFU/ml。EDTA作用后荧光显微镜下可见多糖被破坏,明显减少。激光共聚焦显微镜下可见EDTA作用后生物膜死菌比例增加,菌落变稀疏。ISA软件分析结果显示:5 MIC的EDTA作用后生物膜厚度(d)由(22.59±4.13)μm降至(8.97±2.45)μm,t=8.515,P<0.05;AP(区域孔率)由0.89±0.07增加至0.97±0.02,t=-2.653,P<0.05;ADD(平均扩散距离)由3.08±0.96降至1.59±0.24,t=4.510,P<0.05;TE(结构熵)由6.25±0.79降至3.02±0.67,t=9.375,P<0.05;0.1 MIC的EDTA效果没有5 MIC明显。结论EDTA可以破坏铜绿假单胞菌生物膜的结构,增强抗生素对生物膜杀菌活性。

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