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miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

         
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目的 用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化（EMT）的抑制作用。方法 用miR-140模拟物（miR-140模拟物组）、miR-140阴性对照（阴性对照组）转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果 划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低（χ~2=5.550,P〈0.05;χ~2=6.995,P〈0.05）。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为（0.55±0.02）、（0.89±0.06）和（1.05±0.06）。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组（t=8.823,P〈0.05;t=11.480,P〈0.05）。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为（0.98±0.11）、（0.68±0.07）和（0.38±0.04）。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组（t=7.990,P〈0.05;t=21.348,P〈0.05）。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为（0.57±0.12）、（0.78±0.08）和（1.08±0.21）。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组（t=8.921,P〈0.05;t=18.657,P〈0.05）。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。

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