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首页> 中文期刊> 《中华医院感染学杂志》 >芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异

芯片电泳快速检测乙型肝炎病毒YMDD变异

         
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目的利用芯片电泳高分辨力和分析快速的优点,建立一种基于芯片电泳的乙型肝炎病毒YMDD耐药性突变的检测方法。方法利用序列特异性PCR联合芯片电泳检测乙型肝炎病毒YMDD变异;将YVDD、YIDD标准质粒分别按梯度稀释108～100进行检测,将105拷贝/μl YVDD、YMDD质粒及YIDD、YMDD质粒分别按99∶1、50∶50、20∶80、10∶90、5∶95、1∶99混合检测,评价该方法的灵敏度;用芯片电泳法检测86份经拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者血清样品中YMDD突变情况,并将其结果与荧光定量PCR比较;两种方法结果不一致的标本进行DNA测序鉴定。结果芯片电泳法能够在3 min内实现HBV YMDD变异检测,标准YVDD、YIDD质粒的检测限均为101拷贝/μl;不同比例(V∶M或I∶M)的混合质粒,最小比例突变检测率YVDD为5.0%,YIDD为10.0%;在86份标本中,芯片电泳检出总变异65份,突变率为75.6%,其中YVDD变异32份、YIDD变异23份、YVDD+YIDD混合变异为10份,荧光定量PCR检出总变异62份,突变率为72.1%,其中YVDD变异30份、YIDD变异29份、YVDD+YIDD混合变异为3份,两种方法检测结果差异无统计学意义(Kappa=0.609);两种方法检测结果不一致的标本20份,经测序结果显示,YMDD野生株6份、YVDD变异7份、YVDD+YIDD混合变异7份。结论芯片电泳法检测YMDD变异具有简单、快速、灵敏度和准确度高的优点,适合于临床实验室开展乙型肝炎病毒YMDD变异的检测。

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