登革-日本脑炎嵌合病毒样颗粒的设计与构建

胡珍; 尚伟龙; 张俊磊; 朱军民; 杨杰; 刘佳; 方昕; 袁文常; 程航; 胡晓梅; 饶贤才

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登革-日本脑炎嵌合病毒样颗粒的设计与构建

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目的设计构建登革-日本脑炎嵌合蛋白表达载体,制备嵌合病毒样颗粒。方法根据登革病毒样颗粒的形成机制及日本脑炎病毒中和性抗原表位的分布,设计并构建登革-日本脑炎嵌合蛋白表达载体,转染BHK-21细胞,筛选能表达目标蛋白的G418抗性克隆,收集细胞培养上清,纯化病毒样颗粒,用Western-blot和电镜检测病毒样颗粒的形成。结果用RT-PCR扩增、酶切和连接等分子生物学方法成功构建了序列及阅读框均正确的重组表达质粒pCI-SMEJ-14#;将该质粒转染BHK-21细胞,经0.6 g/LG418筛选获得4个能表达目标嵌合蛋白的克隆,从培养的细胞上清中能纯化出直径30~100 nm的病毒样颗粒。结论所设计的登革-日本脑炎病毒嵌合蛋白能在BHK-21细胞中产生病毒样颗粒,为制备新一代登革-日本脑炎嵌合型疫苗奠定了良好基础。

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来源
《中国预防医学杂志》 |2011年第8期|645-649|共5页
作者
胡珍; 尚伟龙; 张俊磊; 朱军民; 杨杰; 刘佳; 方昕; 袁文常; 程航; 胡晓梅; 饶贤才;
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作者单位

第三军医大学微生物学教研室重庆市微生物工程实验室;

重庆400038;

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正文语种 chi
中图分类医学免疫学;
关键词
登革病毒; 日本脑炎病毒; 病毒样颗粒;

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