基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增技术检测GII型诺如病毒基因

罗剑鸣; 吴希阳; 徐子乾; 罗乐; 聂凯; 杨梦婕; 曾亚岚; 段招军; 马学军

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建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediatedisothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于GII型诺如病毒基因检测。针对诺如病毒RNA依赖的RNA聚合酶和衣壳蛋白基因序列(RNA-dependant RNA polymerase and capsid protein gene)设计出6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行扩增反应60min。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准,并经琼脂糖凝胶电泳验证。本文利用此技术对不同腹泻病毒进行了特异性分析,对体外转录的GII型诺如病毒RNA的梯度稀释进行了灵敏度分析,同时与逆转录PCR(RT-PCR)方法进行比较,并对93份腹泻患者粪便中的病毒核酸进行了检测。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,灵敏度达到1 000拷贝/μLRNA分子水平,与常规检测RT-PCR方法相当。对临床标本的阳性检出率也与常规RT-PCR相当。由于此方法特异性强,灵敏度较高,耗时短,结果直观,因此有望用于GII型诺如病毒的现场快速检测。

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来源
《病毒学报》 |2012年第2期|165-171|共7页
作者
罗剑鸣; 吴希阳; 徐子乾; 罗乐; 聂凯; 杨梦婕; 曾亚岚; 段招军; 马学军;
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作者单位

暨南大学食品科学与工程系;

广州510632;

中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室;

北京102206;

华南理工大学轻工与食品学院;

广州510640;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肠道病毒与肝炎病毒;基因工程（遗传工程）;
关键词
逆转录环介导等温扩增; GII型诺如病毒;

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