scFvCD20:sTRAIL蛋白诱导BJAB细胞凋亡的实验研究

杨雨琪; 张晓龙; 张砚君; 吕军强; 孙睿声; 安鹏姣; 于楠楠

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研究融合蛋白scFvCD20:sTRAIL诱导B淋巴瘤细胞BJAB凋亡的发生以及凋亡相关蛋白的表达变化。采用PCR、重叠PCR、酶切、连接等方法构建pLentiR.scFvCD20:sTRAIL、pLentiR.ISZ-sTRAIL、pLentiR.scFvCD20及pLentiR.CopGFP慢病毒表达载体,瞬时转染293T细胞获得含有scFvCD20:sTRAIL融合蛋白的细胞培养上清,采用CCK8细胞增殖抑制实验检测scFvCD20:sTRAIL融合蛋白对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其对BJAB细胞诱导凋亡,Western blotting检测凋亡过程中内源性及外源性凋亡信号传导途径相关蛋白的变化。结果显示,成功构建了慢病毒表达载体pLentiR.scFvCD20:sTRAIL、pLentiR.ISZ-sTRAIL、pLentiR.scFvCD20及pLentiR.CopGFP,瞬时转染293T细胞后并可获得融合蛋白的表达。与ISZ-sTRAIL比较,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可不同程度地提高对CD20阳性BJAB细胞的生长抑制作用,凋亡细胞增多,其中Bcl-2表达下降、Bax表达升高,Caspase 8、Caspase 9、Caspase 3及PARP被特异性剪切活化。研究表明,融合蛋白scFvCD20:sTRAIL可诱导BJAB细胞凋亡,与bcl-2/bax的表达变化以及Caspase的剪切活化有关。

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来源
《现代免疫学》 |2016年第3期|183-188|共6页
作者
杨雨琪; 张晓龙; 张砚君; 吕军强; 孙睿声; 安鹏姣; 于楠楠;
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作者单位

天津医科大学药学院基础医学院;

天津300070;

中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液研究所实验血液学国家重点实验室;

天津300020;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R392.5;
关键词
CD20; TRAIL; B淋巴细胞; 凋亡; 蛋白表达;

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