毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

董莉莉; 邓小昭; 钟辉; 姚文娟; 于娟; 杨静静

首页> 中文期刊> 《中国生物化学与分子生物学报》 >毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

开具论文收录证明 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

通过毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶(xylose reductase,XR)基因定点突变,获得NADH高亲和力的毕赤酵母木糖还原酶(PsXR),改善了辅酶不同而导致的酿酒酵母胞内氧化还原失衡.同时克隆了PsXR编码基因,通过BLAST工具进行同源性搜索,并用生物软件进行序列比对和结构分析,确定突变位点.用融合PCR方法进行定点突变,并在大肠杆菌表达系统中进行融合表达,且对表达产物进行HIS-TAG亲和纯化,分光光度法检测酶活性,计算比活力.本研究成功获得突变XR编码基因,并收集了纯化的突变蛋白.酶活性检测和比活力计算显示,3种突变酶对2种辅酶的亲和力在一定程度上都发生了变化.与未突变的PsXR相比,3种突变酶对辅酶NADPH的亲和力均显著下降,突变酶M3对辅酶NADH的亲和力未发生变化,而突变酶M1和M4对辅酶NADH的亲和力显著升高,其中突变酶M1对NADH的亲和力明显提高,对NADPH的亲和力明显下降,其活性主要依赖辅酶NADH,提示K270R位点在XR与辅酶结合中起关键作用.

著录项

来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2009年第3期|250-256|共7页
作者
董莉莉; 邓小昭; 钟辉; 姚文娟; 于娟; 杨静静;
展开▼
作者单位

南京医科大学基础医学院;

南京210029;

南京军区疾病预防控制中心;

南京210002;

中国药科大学生命科学学院;

南京210009;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;烟草（菸草）;
关键词
木糖; 木糖还原酶; 还原型辅酶Ⅰ(NADH); 还原型辅酶Ⅱ(NADPH);

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响 [J] . 曾琦锴 ,杜红丽 ,翟志臣 . 生物工程学报 . 2008,第6期
2. 利用定点突变改变树干毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖醇脱氢酶辅酶特性的研究 [J] . 杨金莹 ,葛保胜 ,李燕 . 工业微生物 . 2011,第2期
3. 树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计 [J] . 曾琦锴 ,林影 ,翟志臣 . 华南理工大学学报（自然科学版） . 2009,第6期
4. 树干毕赤酵母Pichia stipitis木糖还原酶的基因在酿酒酵母中克隆和提高表达 [J] . 陈洪章 . 微生物学研究与应用 . 1994,第1期
5. 树干毕赤酵母(Pichia Stipitis)木糖还原酶(xyl1)基因克隆与序列分析 [J] . 孙博 ,葛菁萍 . 生物信息学 . 2011,第2期
6. Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响 [C] . 曾琦锴 ,杜红丽 ,翟志臣 . 2008年中国工业生物技术发展高峰论坛 . 2008
7. 黑曲霉植酸酶基因的定点突变及其在毕赤酵母的表面展示 [A] . 余道兵 . 2017

毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅