创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP检测方法的建立及初步应用

周顺; 高志鑫; 张敏

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创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP检测方法的建立及初步应用

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为建立创伤弧菌和副溶血弧菌的双重环介导等温扩增（loop—mediated isothermal amplification，LAMP）检测方法，本试验以创伤弧菌metalloprotease基因和副溶血弧菌ompA基因为靶点设计LAMP扩增引物，并在内引物间添加不同的酶切位点，通过对反应时间和温度的优化及酶切反应，成功建立了双重LAMP检测方法，并对其检测特异性、灵敏度和实际应用性进行了研究。结果显示，62℃反应45min时可同时检测到2种弧菌的存在，通过限制性内切酶酶切，可准确区分2种弧菌。该方法比普通PCR检测方法灵敏度高10^2～10^3倍。选择17株细菌菌株作为检测模板，发现除创伤弧菌和副溶血弧菌反应结果呈阳性外，其他均为阴性。以大菱鲆作为实验动物，检测双重LAMP技术的实际应用可能，该方法可准确检测并鉴定出组织和血液中感染的细菌种类，其灵敏度可达374～410CFU／g（mL）。SYBR Green Ⅰ是一种结合于DNA双链小沟中的荧光染料，反应产物加入该染料后，极易用肉眼判别。本试验成功建立了创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法，该方法可用于水产养殖中病原菌的早期诊断。

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来源
《中国兽医学报》 |2016年第11期|1875-1881|共7页
作者
周顺; 高志鑫; 张敏;
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作者单位

中国海洋大学水产学院;

山东青岛266100;

青岛农业大学海洋科学与工程学院;

山东青岛266109;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
创伤弧菌; metalloprotease基因; 副溶血弧菌; ompA基因; 双重LAMP;

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