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人乳头瘤病毒引起裸鼠生殖系统病变的研究

         
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重组的腺病毒Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7在293细胞中包装后得到上清液,将Ad-CMV-E6/E7和Ad-K14-E6/E7病毒上清液以及做为对照的重组腺病毒空载体pAd-CMV和pAdtrack-K14的上清液,经过纯化后,通过裸鼠的尾缘静脉注射到裸鼠体内,每天注射0.05 mg雌激素给注射病毒的裸鼠,同时做对照。12周后给裸鼠注射2.5%的阿佛丁进行麻醉,取其子宫、阴道、卵巢、乳腺等组织,浸泡在3.75%的多聚甲醛中4℃固定过夜,做石蜡包埋切片、HE染色、免疫组化检测P53蛋白和Bcl-2蛋白的表达,取裸鼠的各个组织提取DNA、RNA和蛋白质,然后分别检测有无重组腺病毒的感染、病毒表达的情况及E6蛋白的表达。HE染色结果显示注射腺病毒Ad-K14-E6/E7的裸鼠(实验组2)子宫颈-子宫体移行组织增生明显。SP法免疫组化检测突变型P53和Bcl-2在该组裸鼠的子宫基质细胞表达增加,并且RT-PCR检测该组裸鼠子宫组织也有E6/E7的表达,Western Blot检测该组子宫组织也有E6蛋白的表达。动物实验结果表明K14启动子增加了E6/E7在裸鼠子宫组织的表达,同时也发现该组裸鼠的子宫颈-子宫体移行组织有增生改变。

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