猪德尔塔冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

钱炳旭; 白雪雁; 张成成; 郭梦娇; 李梦娇; 廖凯; 薛峰; 吴艳涛; 张小荣

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猪德尔塔冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

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通过DNAStar Protean软件对猪德尔塔冠状病毒(porcine Deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白氨基酸序列进行分析,选取抗原性较强的区段(265~342 aa),根据大肠杆菌密码子使用的偏嗜性进行优化设计并人工合成了对应的基因片段N-Opti。利用融合表达载体pET-32a进行原核表达,获得的融合蛋白携带His标签,命名为PDCoV-N-His,且呈可溶性表达。Western blot鉴定结果显示,该重组N蛋白约为31 kDa,与预期相符。利用Ni-NTA亲和层析介质纯化重组N蛋白作为包被抗原进行ELISA检测,并对反应条件进行摸索、优化,建立了检测PDCoV特异性抗体的间接ELISA方法。经测定,该方法具有良好的特异性且重复性良好,与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRoV)特异性阳性血清无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%。应用该方法对20份已知阳性血清和20份阴性血清分别进行检测,结果显示阳性符合率为100%(20/20),阴性符合率为100%(20/20)。结果表明,该方法的特异性良好,可以进一步用于PDCoV感染的快速诊断和流行病学调查。

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来源
《中国兽医学报》 |2021年第7期|1234-1241|共8页
作者
钱炳旭; 白雪雁; 张成成; 郭梦娇; 李梦娇; 廖凯; 薛峰; 吴艳涛; 张小荣;
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作者单位

扬州大学兽医学院江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;

江苏扬州225000;

南京农业大学动物健康与食品安全国际合作实验室;

江苏南京210095;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
猪德尔塔冠状病毒; 核衣壳(N)蛋白; 原核表达; 间接ELISA;

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