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旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡对小鼠免疫保护作用

         
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本试验通过差速超速离心法获得旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡(Trichinella spiralis muscle larvae extracellular vesicles,Ts-ML-EVs),经透射电镜观察、纳米颗粒追踪分析、流式细胞术和Western blot鉴定。选择6~8周龄的健康雌性BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只。试验设计为PBS对照组(PBS组)、佐剂对照组(PBS+佐剂组)、旋毛虫肌幼虫期排泄分泌产物免疫组(Ts-ML-ES+佐剂组)以及旋毛虫肌幼虫期胞外囊泡免疫组(Ts-ML-EVs+佐剂组),分别取相应抗原与佐剂等体积混合采用多点皮下注射方式免疫小鼠。首免后第2,4周各加强免疫1次,剂量不变。三免后2周,每只小鼠灌胃300条旋毛虫肌幼虫,灌胃后6 d每组取2只剖杀,统计旋毛虫成虫减虫结果;攻虫35 d后所有小鼠全部处死,计算肌幼虫减虫率。每次免疫前、攻虫前以及处死前眼眶采血收集血清并保存,统一进行ELISA分析。结果显示:成功获得Ts-ML-EVs,随着免疫次数增加,小鼠血清中特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgA和IgE抗体水平均显著上升,在三免后2周达到最高;而IgM在二免后2周抗体水平达到最高,三免后抗体水平开始下降。Th1(IFN-γ、IL-12)和Th2(IL-4、IL-10)型细胞因子水平同样显著升高,在三免后2周达到最高,且Th2型变化更加明显,表明Ts-ML-EVs可以使小鼠产生体液免疫和以Th2型免疫反应为主的细胞免疫应答。Ts-ML-EVs的成虫和肌幼虫减虫率分别为23.4%和43.7%,表明Ts-ML-EVs对小鼠具有较好的免疫保护效果,试验为研制旋毛虫病新型高效疫苗奠定基础。

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