重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定

匡文斌; 成凤; 秦晓林; 范晓卿; 王秦; 董晋豫; 梁勤东; 涂植光

首页> 中文期刊> 《中国生物制品学杂志》 >重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定

重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定

开具论文收录证明 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的构建携带绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签和hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法以pcDNA3/hNK4质粒为模板,采用高保真DNA聚合酶扩增hNK4基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-hNK4,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP,经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,经4轮扩增后,测定病毒滴度;将重组腺病毒感染AD-293细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测感染细胞中NK4基因的转录及蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hNK4-EGFP对肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)诱导的MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;经包装及4轮扩增后,重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的滴度可达1.5×1011PFU/ml;经RT-PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的NK4基因能够在AD-293细胞中表达;HGF可促进MDA-MB-231细胞增殖,而Ad5-hNK4-EGFP可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建了表达hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,其可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞的增殖,为进一步深入研究HGF和NK4的功能、相互作用及作用机制奠定了基础,也为乳腺癌的靶向基因治疗提供了一个新的靶点。

著录项

来源
《中国生物制品学杂志》 |2012年第6期|676-681|共6页
作者
匡文斌; 成凤; 秦晓林; 范晓卿; 王秦; 董晋豫; 梁勤东; 涂植光;
展开▼
作者单位

重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室;

重庆400016;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因载体;
关键词
腺病毒; 肝细胞生长因子; NK4; 乳腺癌; 基因治疗;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. Kozak序列引导的表达兔出血症病毒2型VP60蛋白重组腺病毒的构建及鉴定 [J] . 肖璐 ,于吉锋 ,罗燕 . 中国畜牧兽医 . 2023,第8期
2. 结核分枝杆菌抗原融合蛋白Ag85B-ESAT6和Rv2031c-Rv2626c重组腺病毒的构建及鉴定 [J] . 王丽梅 ,姜泓 ,康健 . 中国人兽共患病学报 . 2022,第3期
3. 表达弓形虫TgGRA4重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J] . 李莉 ,周博宇 ,李威 . 中国动物传染病学报 . 2022,第3期
4. 秦川牛PDHB基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 [J] . 张愈 ,王晓宇 ,周兴 . 中国牛业科学 . 2022,第4期
5. 表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J] . 陈廷炜 ,孟宪踊 ,王铁成 . 野生动物 . 2021,第3期
6. H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗构建及鉴定 [C] . 温树波 ,谭磊 ,赵权 . 中国畜牧兽医学会家畜传染病分会第八次全国会员代表大会暨第15次学术研讨会 . 2013
7. 2015-2017年禽腺病毒的分离鉴定及分别表达禽腺病毒penton和fiber2蛋白重组新城疫病毒的构建 [A] . 程昊 . 2018

重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅