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首页> 中文期刊> 《中国优生与遗传杂志》 >长链非编码RNA H19通过靶向miR-18b调控Wnt/β-catenin信号通路对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

长链非编码RNA H19通过靶向miR-18b调控Wnt/β-catenin信号通路对宫颈癌细胞顺铂耐药性的影响

         
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目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)H19对宫颈癌顺铂耐药性的影响及分子机制。方法 体外培养人宫颈癌细胞株HeLa,采用顺铂梯度暴露法构建宫颈癌顺铂耐药细胞HeLa/DDP;qRT-PCR检测正常宫颈细胞ECT1/E6E7、HeLa细胞和HeLa/DDP细胞中H19、miR-18b的相对表达水平;以HeLa/DDP细胞为研究对象,根据转染载体不同将细胞分为pcDNA-NC组、pcDNA-H19组、si-H19组、si-H19+inhibitor-NC组、si-H19+miR-18binhibitor组;qRT-PCR检测细胞转染后H19和miR-18b表达水平;MTT法检测细胞存活率和顺铂半数抑制浓度(顺铂IC50值);流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证H19与miR-18b的靶向关系;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白cleavedcaspase-3、Bax、Bcl-2及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果 与HeLa细胞比较,HeLa/DDP细胞中H19表达水平显著升高(P<0.05),miR-18b表达水平显著降低(P<0.05);干扰H19的表达后,HeLa/DDP细胞存活率和顺铂IC50、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、cleavedcaspase-3、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实H19可负向调控miR-18b的表达;抑制miR-18b表达可明显逆转干扰H19对HeLa/DDP细胞增殖及凋亡的影响,从而降低HeLa/DDP细胞对顺铂的耐药性。结论 干扰H19可能通过负向调控miR-18b表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性。

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