基于重组截短RHDV VP60蛋白的间接ELISA抗体检测方法

孙培姣; 周迎春; 于雪; 李本科; 王辉暖; 王雅雯; 于新友; 杨慧; 王蓉; 李振伟; 王玉茂; 沈志强; 肖跃强

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基于重组截短RHDV VP60蛋白的间接ELISA抗体检测方法

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为了建立一种快速、特异、敏感的RHDV抗体检测方法,对VP60蛋白基因的抗原表位区域进行分析,截取VP60-1、VP60-2、VP60-3、VP60-semi1和VP60-semi2,大肠杆菌表达后纯化获得重组截短蛋白。经抗原、抗体结合反应比较,以VP60-semi1为包被抗原检测效果最好,并建立了基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法。经优化,该方法的最佳条件:抗原包被质量浓度为0.1μg/孔,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭1 h;血清稀释度为1∶200,37℃孵育1 h;最后37℃作用显色15 min。该方法与血凝抑制(HI)检测相比,敏感性好,阳性血清稀释至1∶6 400仍可检出;批内、批间变异系数分别为0.46%~4.97%和2.68%~8.88%,重复性好;符合率检测显示,与HI法的符合率为89.29%,与免疫保护试验结果符合率为100%。结果表明,建立了一种基于重组蛋白VP60-semi1的间接ELISA抗体检测方法,可用于监测兔群免疫后抗体水平动态并指导疫苗免疫,以及该病的流行病学调查等。

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来源
《中国兽医学报》 |2021年第7期|1264-1269|共6页
作者
孙培姣; 周迎春; 于雪; 李本科; 王辉暖; 王雅雯; 于新友; 杨慧; 王蓉; 李振伟; 王玉茂; 沈志强; 肖跃强;
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作者单位

山东省滨州畜牧兽医研究院;

山东滨州256600;

山东绿都生物科技有限公司;

山东滨州256600;

安徽省动物疫病预防与控制中心;

安徽合肥230061;

滨州市畜牧兽医管理服务中心;

山东滨州256600;

西安交通大学基础医学院;

陕西西安710061;

锦州医科大学畜牧兽医学院;

辽宁锦州121000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
RHDV; 截短VP60蛋白; 间接ELISA方法; 抗体检测;

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