壮腰通络方含药血清对TNF-α介导的髓核细胞焦亡恶性循环的影响

冯蓬; 高春雨; 孙凯; 朱立国; 高景华; 李路广; 李建国; 车颖

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目的探讨壮腰通络方延缓腰椎间盘退变的可能机制。方法利用佛波酯、干扰素γ和脂多糖将THP-1细胞诱导为M1巨噬细胞,与髓核细胞建立Transwell共培养体系。首先以胎牛血清作为对照血清,采用MTT法分析不同体积分数(5%、10%、15%、20%)壮腰通络方大鼠含药血清对M1和髓核细胞活性的影响,筛选后续实验药物浓度。随后建立实验一,分为髓核细胞对照组、M1巨噬细胞对照组、髓核细胞+壮腰方组、髓核细胞+肿瘤坏死因子α(TNF-α)组、髓核细胞+TNF-α+壮腰方组、共培组、共培+壮腰方组,每组3个复孔。利用ELISA法检测各组培养上清白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)含量,实时荧光定量PCR检测髓核细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测髓核细胞中Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达。实验二利用TNF-α过表达质粒或TNF-α空载体质粒干预M1巨噬细胞,并在共培养条件下分为共培组、空载体质粒+共培组、空载体质粒共培+壮腰方组、共培+壮腰方组、过表达质粒共培+壮腰方组、过表达质粒+共培组,每组3个复孔。利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测各组M1巨噬细胞中TNF-αmRNA和蛋白表达。结果最终筛选出10%的壮腰通络方含药血清进行后续实验。实验一结果显示,与髓核细胞对照组比较,髓核细胞+壮腰方组IL-1β、IL-18含量及mRNA、GSDMD表达差异无统计学意义(P>0.05),而髓核细胞+TNF-α组和共培组IL-1β、IL-18含量及mRNA、GSDMD表达均显著增加(P0.05)。与空载体质粒+共培组比较,空载体质粒共培+壮腰方组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。与共培组和空载体质粒+共培组比较,共培+壮腰方组TNF-αmRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与共培+壮腰方组比较,过表达质粒共培+壮腰方组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01);与过表达质粒共培+壮腰方组比较,过表达质粒+共培组TNF-αmRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.01)。结论壮腰通络方含药血清能够通过降低M1巨噬细胞中TNF-α的表达,抑制由TNF-α诱导的髓核细胞焦亡恶性循环,延缓腰椎间盘退变。

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来源
《中医杂志》 |2023年第21期|2224-2231|共8页
作者
冯蓬; 高春雨; 孙凯; 朱立国; 高景华; 李路广; 李建国; 车颖;
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作者单位

中国中医科学院望京医院;

北京市朝阳区100102;

山东中医药大学;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肿瘤学;
关键词
腰椎间盘退变; 壮腰通络方; M1巨噬细胞; 髓核细胞; 细胞焦亡; 肿瘤坏死因子α;

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