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PAF对BV2细胞炎症因子分泌的影响及转录组学分析

         
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探究血小板活化因子（Platelet activating factor,PAF）对BV2细胞炎症因子分泌的影响及初步推测其调控机制。外源PAF(2×10-5M)作用于BV2细胞24 h,36 h,48 h后，（1）CCK8实验检测空白对照组，Mock组和PAF处理组细胞活性；（2）ELISA实验测炎症因子TNFα、IL-6、Cxcl2、IL-1a的分泌；（3）Western Blot检测炎症介质COX-2蛋白水平；（4）对PAF处理24h的BV2细胞以及对应的Mock组细胞进行RNA测序得到转录组测序结果；（5）GO和KEGG富集分析后，运用String数据库配合Cytoscape软件找出炎症相关的Hub基因并挑选出以下基因（Ccl4、Ccl3、Ccl7、IL-1a、Cxcl2、IL1f9、IL34、COX-2、Serpinb1a）进行qPCR验证。实验结果表明，PAF作用时间为24 h,36 h,48 h后，相比对照组：（1）BV2细胞活性降低；（2）上清液中的炎症因子TNFα，IL-6,IL-1a,Cxcl2分泌增加；（3）炎症介质COX-2蛋白表达水平上调；（4）从组学中筛选出炎症反应相关的Hub基因有：COX-2、Ccl3、Ccl4、Cxcl2、Ccl7、IL-1a、Mapk14、Cd80、Casp1、Src、Nos2、Serpinb1a、Serpinb9、Il1r1;（5）qPCR验证表达上调的基因包括Ccl3、Ccl4、Ccl7、IL-1a、Cxcl2、IL1f9、IL34、COX-2，表达下调的基因Serpinb1a。说明PAF可以诱导BV2细胞释放炎症因子，PAF可能是促进“细胞因子风暴”的重要介质，根据转录组学分析结果我们锁定了炎症反应密切相关的14种Hub基因，并对产生炎症因子的分子机制提出了初步推测。

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