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P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生

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目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。

著录项

来源
《中国输血杂志》 |2019年第3期|222-227|共6页
作者
常晶; 滕嘉雯; 孙文翠; 曾加辉; 张勇刚; 潘旭; 周涯; 赖默温; 边国慧; 周琼秀; 刘嘉馨; 陈波; 马峰;
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作者单位

中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;

四川成都610052;

中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室;

四川大学生物治疗国家重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类血液与循环生理;
关键词
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂CDKN1A(P21); 多西环素(DOX); 真核诱导过表达系统; 人胚胎干细胞(hESC); 主动脉-性腺-中肾(AGM)基质细胞; 造血发生;

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