弓形虫三磷酸核苷水解酶基因克隆、表达与鉴定

沙丹; 谭峰; 潘长旺; 梁韶晖

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目的对刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶基因(NTPase)进行克隆、表达和鉴定。方法采用PCR扩增刚地弓形虫RH株的NTPase基因,克隆入pGEM-TEasy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,并转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中进行诱导表达。用镍-次氮基三乙酸亲和层析柱纯化重组质粒pBAD-HisB-NTPase表达产生的含组氨酸的重组蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析蛋白表达产物。结果PCR扩增得到特异的刚地弓形虫NTPase-Ⅱ基因序列,经测序鉴定无基因突变。SDS-PAGE结果表明NTPase-Ⅱ基因在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约70000,与理论值相近。Western blotting分析结果显示,纯化的重组蛋白可被弓形虫感染的鼠血清及鼠抗重组蛋白血清识别。结论所克隆表达的弓形虫NTPase-Ⅱ重组蛋白具有良好的抗原性。

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来源
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 |2007年第6期|447-450|共4页
作者
沙丹; 谭峰; 潘长旺; 梁韶晖;
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作者单位

温州医学院寄生虫学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类弓形体;
关键词
弓形虫; 三磷酸核苷水解酶基因; 融合蛋白; 抗原性;

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