多重PCR技术检测恶性疟原虫抗药性相关分子标志的方法研究

张国庆; 汤林华; 官亚宜; 周水森; 郑彬; 黄芳; 武松; 刘燕

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目的建立恶性疟原虫5个主要抗药性相关基因的单管多重PCR扩增方法,用于恶性疟原虫抗药性分子标志检测。方法依据各基因参考序列,运用Primer Premier 5.0和Oligo6.0软件,设计5对特异性引物,采用Hot Start Taq DNA聚合酶,设置递增延伸温度,对恶性疟原虫标准株(3D7、Dd2和HB3)、分离株(FCC1/HN、CMH/YN)、现场标本(来源于海南、云南和缅甸)、近缘虫种对照(间日疟原虫、伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫、杜氏利什曼原虫和牛源隐孢子虫)和空白对照(以H2O为模板)进行5个抗药性相关基因(包括恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白基因Pfcrt、多药抗性基因Pfmdr1、二氢喋酸合成酶基因Pfdhps、二氢叶酸还原酶基因Pfdhfr和三磷酸腺苷酶第6亚基基因PfATPase6)的单管多重PCR扩增,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增结果,测定扩增产物序列,并与参考序列(3D7株)比对。结果经电泳,恶性疟原虫标准株、分离株和现场标本的多重PCR扩增产物均可见5条目标条带。测序结果与参考序列比对,高度同源,最低同源性为98.5%。模板DNA量达0.1ng即满足扩增要求,近缘虫种对照和空白对照未见扩增产物。结论多重PCR技术实现了单管1次反应完成5个抗药性相关基因的扩增,该方法灵敏,特异性好,有助于提高恶性疟原虫抗药性分子标志的检测效率。

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来源
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 |2007年第6期|451-456|共6页
作者
张国庆; 汤林华; 官亚宜; 周水森; 郑彬; 黄芳; 武松; 刘燕;
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作者单位

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所;

卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室;

世界卫生组织疟疾;

血吸虫病和丝虫病合作中心;

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正文语种 chi
中图分类 R382.31;
关键词
恶性疟原虫; 药物抗性; 单核苷酸多态性; 多重PCR;

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