hrCEMP1真核表达载体的构建及其在成纤维细胞株中的表达

刘玉; 孙卫斌

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目的:构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒。方法:采用PCR方法扩增hrCEMP1基因,并在两端添加合适的酶切位点;利用定向克隆技术将hrCEMP1基因插入到载体pcDNA3.1中,重组的pcDNA3.1-CEMP1在大肠杆菌DH5α内扩增后,通过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建成功;利用高效率的阳离子聚合物,将经过鉴定的pcDNA3.1-CEMP1转染入NIH3T3细胞中,并以RT-PCR检测hrCEMP1基因的转录。结果:通过对重组质粒pcDNA3.1-CEMP1进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达重组质粒pcDNA3.1-CEMP1构建成功,开放阅读框架正确;转染细胞株的RT-PCR结果中观察到特异性242bp片段。结论:成功构建含hrCEMP-1基因真核表达质粒pcDNA3.1-CEMP1,并可在NIH3T3细胞株中mRNA水平表达。

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来源
《口腔医学研究》 |2010年第6期|809-812|共4页
作者
刘玉; 孙卫斌;
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作者单位

南京大学口腔医学院牙周病科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类牙周病;
关键词
牙骨质蛋白; 真核表达载体; NIH3T3细胞株;

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