端粒酶逆转录酶启动子hTERT／U6嵌合启动子的siRNA表达载体的构建及鉴定

姜习新; 张鹏辉; 刘北忠; 涂植光; 杨毅; 刘靳波

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目的构建有hTERT/U6嵌合启动子的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)表达载体,并用分子生物学的技术和方法验证其对肝癌细胞SMMC-7721的效应。方法构建siRNA-EGFP-PTZU6+1表达载体,将其转染到稳定表达EGFP的肝癌细胞株7721(EGFP-7721),观察细胞荧光的变化及RT-PCR,Western blot筛选出更有效的siRNA-EGFP-PTZU6+1载体。PCR扩增端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase promoter,hTERT)启动子的核心序列,构建针对EGFP基因的hTERT/U6嵌合启动子siRNA表达载体(EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT),正向和反向插入的hTERT启动子各1个,并将其转染至EGFP-7721细胞中,RT-PCR验证其效应。结果RT-PCR,Western blot结果表明两重组质粒siRNA-EGFP-PTZU6+1转染EGFP-7721细胞后EGFP基因的表达无统计学差异,但与对照组比较均显著抑制了EGFP基因(P<0.01)。而且,RT-PCR结果显示,反向插入的重组质粒EGFP-siRNA-PTZU6+1-U6/hTERT与对照组相比显著抑制了EGFP基因的表达(P<0.05)。结论构建的含hTERT/U6嵌合启动子的siRNA表达载体在肝癌细胞中具有功能活性,为探讨基因的靶向治疗奠定了基础。

著录项

来源
《陆军军医大学学报》 |2008年第8期|763-765|共3页
作者
姜习新; 张鹏辉; 刘北忠; 涂植光; 杨毅; 刘靳波;
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作者单位

重庆医科大学医学检验系;

临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室;

重庆市市级重点实验室;

重庆400016;

重庆医科大学附属儿童医院检验科;

重庆400016;

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正文语种 chi
中图分类遗传学实验（实验遗传学）、实验方法及设备;
关键词
端粒酶逆转录酶启动子; 嵌合启动子; siRNA表达载体; PTZU6+1:siRNA;

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