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枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因优化及表达

         

摘要

研究旨在获得高效表达的枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶基因毕赤酵母工程菌株。采用PCR方法,从枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis基因中克隆出甘露聚糖酶全长基因(WBMAN);并利用定点突变、重叠PCR的方法,获得突变型甘露聚糖酶基因;将其连接至载体pPICZαA中,获得重组质粒pPIC-WB-MANmut,用DpnI酶切重组质粒使其线性化,用电击的方法把线性化的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)X33中,经大量筛选,获得一株高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株。结果表明:在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导48 h发酵酶活力达到120 U/ml,最适作用温度和pH值分别是40℃和6.0。枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶在毕赤酵母中获得了高效分泌表达,具有开发作为工业用酶的潜能。

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