抗弓形虫P30单克隆抗体的制备及其抗虫作用观察

魏庆宽; 李瑾; 付婷霞; 崔勇; 柏雪莲; 王用斌; 黄炳成; 韩广东; 刘克义

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制备抗弓形虫天然P30、重组P30的单克隆抗体(mAb),并研究它们对虫体的影响,为弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定奠定基础。采用弓形虫天然P30、重组P30及全虫抗原(对照)分别免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选稳定分泌高滴度mAb的杂交瘤细胞株。用ELISA法测定mAb亚类和效价;通过SDS-PAGE和West-ern blot进行特异性鉴定;Giemsa染色观察杂交瘤细胞的染色体数目;利用扫描电镜及间接荧光抗体试验(IFAT)观察mAb对弓形虫的杀伤作用及其靶抗原定位。结果表明,筛选出2株(2B3、1H6)特异性较好、能稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。Western blot结果显示,2B3、1H6产生的mAb与弓形虫全抗原的阳性反应带均在30 000 Mr处;mAb亚类均属IgM,其效价(ELISA)分别为:2B3 1∶102 400、1H6 1∶51 200;2株细胞的染色体数均在100条以上。电镜观察与mAb作用后的弓形虫虫体聚集、肿胀,膜变厚,表面出现缺口和空洞,甚至虫体变形、破碎。抗弓形虫天然P30的mAb能识别重组体pET-30a-P30的表达蛋白。成功制备了抗弓形虫天然P30、重组P30的mAb,可进一步用于弓形虫病诊断及保护性抗原鉴定研究。

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来源
《现代免疫学》 |2006年第6期|488-493|共6页
作者
魏庆宽; 李瑾; 付婷霞; 崔勇; 柏雪莲; 王用斌; 黄炳成; 韩广东; 刘克义;
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作者单位

山东省寄生虫病防治研究所山东省医学科学院寄生虫病分子免疫学重点实验室世界卫生组织淋巴丝虫病绦囊虫病合作中心;

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正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;
关键词
弓形虫; P30; 单克隆抗体;

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