欧文氏菌SCB125中2-酮醛糖酸还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

陈芳; 陈策实; 尹光琳

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根据酶活测定和 PAGE活性染色初步证明欧文氏菌 SCB12 5中存在酶活较高的 2 -酮醛糖酸还原酶 (2 - KR) ,能够以 2 ,5 -二酮 - D-葡萄糖酸 (1)、2 -酮 - L -古洛糖酸 (2 )或者 2 -酮 - D-葡萄糖酸 (3)为底物。抽提欧文氏菌染色体DNA为模板 ,利用 PCR技术扩增 ,克隆得到两个 2 - KR酶基因 (tkr A和 tkr B) ,通过酶切和测序证明 :2 - KR A基因发生多处突变 ,而 2 - KR B基因保守。将含有这两个基因的片段分别连接到表达载体 p BL并转化大肠杆菌 DH 5α后 ,均获得高酶活表达。如果进一步用基因剔除的方法破坏欧文氏菌染色体上野生型 2 - KR基因 ,可以获得一个表达 1还原酶的理想宿主 ,为实现从葡萄糖一步发酵生产维生素 C前体

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来源
《中国医药工业杂志》 |2001年第5期|193-197|共5页
作者
陈芳; 陈策实; 尹光琳;
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作者单位

中国科学院上海生物工程研究中心;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类维生素Ｃ;基因工程（遗传工程）;
关键词
2-酮醛糖酸还原酶; 欧文氏菌; PCR; 克隆; 基因表达; 基因剔除; 维生素C; 前体药;

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