抗β-catenin抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

陈晶; 单保恩; 贺占国; 陈兴; 马洪

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抗β-catenin抗体制备及在结肠癌病理检测中的应用

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制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在结肠癌诊断中的应用价值。应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Westernblot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及结肠癌细胞系SW48和HCT116中β-catenin蛋白的表达。用免疫组化SP法检测β-catenin在正常结肠组织和结肠癌组织中的不同表达。结果,用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔7周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1∶204800(A450=1.01)。将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92000的蛋白条带。与文献报道相符。用抗β-catenin血清做Westernblot分析显示,在Mr为92000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体。从人结肠癌细胞株SW48和HCT116提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均可观察到β-catenin蛋白的表达。人结肠组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常结肠组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在结肠癌组织的细胞浆中可见棕黄色颗粒。制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体。用该抗体检测证实,正常结肠组织β-catenin表达在细胞膜中,而结肠癌组织β-catenin则在细胞浆中表达。

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来源
《现代免疫学》 |2005年第3期|242-244|共3页
作者
陈晶; 单保恩; 贺占国; 陈兴; 马洪;
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作者单位

解放军白求恩国际和平医院检验科;

河北医科大学第四医院科研中心;

美国MD技术公司;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;
关键词
β-catenin抗体; 结肠癌; 免疫组化染色;

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