重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测

杨利军; 杨涛; 牛勃; 程牛亮; 王惠珍; 赵建滨

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重组人肝细胞生长因子α在大肠杆菌中的表达及活性检测

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目的　建立人肝细胞生长因子α链 (rhHGFα)高效原核表达体系。方法　以pRC/CMV hHGF为模板 ,扩增hHGFαcDNA ,继以XhoI酶切为 386和 95 4bp 2个片段 ,亚克隆入pBSKS,DNA测序后 ,将上述两个片段与pBV2 2 0连接 ,构建重组质粒。转化E .coliJM10 9、DH5α和BL2 1(DE3) ,筛选高效表达菌株。分离包涵体 ,8mol/L尿素溶解 ,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白 ,经MTT法检测活性。结果　所克隆的hHGFα基因序列正确 ,筛选出高效表达菌株BY ,经SDS-PAGE显示在相对分子质量 5 2 0 0 0处出现特异的目的蛋白表达带 ,表达量约占全菌蛋白的 2 5 %。表达产物以不溶性的包涵体 (IBs)形式存在 ,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用。结论　已成功表达了rhHGFα蛋白 ,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2005年第1期|19-22|共4页
作者
杨利军; 杨涛; 牛勃; 程牛亮; 王惠珍; 赵建滨;
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作者单位

山西医科大学生物化学与分子生物学教研室;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;病原细菌;
关键词
HGF; 肝细胞生长因子; 高效表达; 蛋白; DH5α; α基因; 大鼠肝细胞; 复性; 包涵体; 结构与功能;

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