重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

孙华; 张自德; 江仁望; 王峰

首页> 中文期刊> 《暨南大学学报：自然科学与医学版》 >重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过IPTG诱导,表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化,用试剂盒检测重组hCAT酶活性,然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用.通过荧光定量PCR(qPCR)测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况.本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体,SDSPAGE检测结果表明,IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白,该蛋白主要以可溶的形式存在,活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg,pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用.qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达,纯化的rhCAT具有活性,hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.这为后续功能研究及性质实验奠定了基础.

著录项

来源
《暨南大学学报：自然科学与医学版》 |2014年第2期|186-191|共7页
作者
孙华; 张自德; 江仁望; 王峰;
展开▼
作者单位

暨南大学药学院;

暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
过氧化氢酶; 表达纯化; 过氧化氢酶活性; DNA损伤保护; 荧光定量PCR;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 自剪切重组麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C 蛋白酶融合蛋白在大肠杆菌表达系统中表达、纯化及活性检测 [J] . 董哲君 ,赵海舰 ,许小毛 . 国际检验医学杂志 . 2014,第020期
2. 重组人谷氧还蛋白1在大肠杆菌中表达条件的优化、纯化及活性检测 [J] . 刘莹莹 ,邹朝霞 ,周宏博 . 生命科学研究 . 2006,第003期
3. 重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测 [J] . 王文棋 ,盖颖 ,陆海 . 北京林业大学学报 . 2006,第3期
4. 人源热休克蛋白HSC70与HPV16型E7融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测 [J] . 侯红军 ,李淑媛 ,赵民朝 . 河北医药 . 2008,第009期
5. 人血管抑制因子vasostatin片段在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性检测 [J] . 姚琼凤 ,王莹 ,吴晓萍 . 感染、炎症、修复 . 2005,第001期
6. 重组破伤风类毒素C段(rTTC)在BL21中的克隆、表达、表达产物纯化及生物活性检测 [C] . 付作申 ,花艳红 ,云国廷 . 第九次全国生物制品学术会议 . 2007
7. 人血管抑制因子vasostatin片段在大肠杆菌中的融合表达、纯化及活性检测 [A] . 姚琼凤 . 2005

相关主题

重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅