大蒜蒜氨酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

来庆勤; 殷承慧; 胡又佳; 于美静; 刘全海

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大蒜蒜氨酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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提取大蒜总RNA,经RT-PCR扩增出1348bp的成熟蒜氨酸酶基因,克隆到pET-28a(+)载体中,构建带有寡聚组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌,经IPTG诱导后的表达产物大部分为包含体,SDS-PAGE电泳和western blotting结果表明目标蛋白的相对分子质量约5.3×104,占菌体总蛋白的45.1%。含6mol/L盐酸胍的溶液,经镍亲和色谱纯化和透析复性,每升摇瓶发酵液可得蛋白143.3mg,得率为13.6%,纯度为97%,蒜氨酸酶的比活力为388u/mg。

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来源
《中国医药工业杂志》 |2010年第7期|496-500|共5页
作者
来庆勤; 殷承慧; 胡又佳; 于美静; 刘全海;
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作者单位

上海医药工业研究院;

上海医药工业研究院;

创新药物与制药工艺国家重点实验室(筹);

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
蒜氨酸酶; 基因克隆; 表达; 纯化;

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