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实时荧光定量RT-PCR在小鼠及人G蛋白mRNA检测中的应用

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摘要

用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LGsαmRNA反义寡核苷酸(GsαODN)作用ECV304细胞24h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,GqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同GqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测.

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2005年第5期|685-690|共6页
作者
熊仁平; 周元国; 陈星云; 刘苹; 夏季; 陈建国;
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作者单位

第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心;

第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科;

第一军医大学检验医学系;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物化学技术;基因的表达;
关键词
实时PCR; 定量; TaqMan探针; G蛋白; RNA;

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