用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达

袁小松; 沈继龙; 汪学龙; 胡元生; 罗庆礼

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用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达

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目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转基因在童虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在童虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功扩增出760 bp和276 bp的预期大小的片段,Western blotting证实了EGFP基因在童虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察表明EGFP主要定位在童虫的皮层和副皮层,虫体前端尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫童虫体内并获得表达。

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来源
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 |2005年第4期|202-205|共4页
作者
袁小松; 沈继龙; 汪学龙; 胡元生; 罗庆礼;
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作者单位

安徽医科大学病原生物学教研室;

安徽省基因研究重点实验室;

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正文语种 chi
中图分类 R383.24;
关键词
日本血吸虫; 电穿孔; 荧光蛋白基因; 转基因; 基因表达;

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