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联合应用TGF-β、TGF-βR siRNA对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路相关基因表达的抑制

         

摘要

目的:探讨TGF-β1、TGF-β1RsiRNA联合应用对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路的干预作用.方法:清洁级健康大鼠36只分为2组:正常对照组(n=6,注射生理盐水)与实验组(n=30).实验组动物在实验第1天和第5天腹腔注射CCl4花生油溶液6mL/kg,造成急性肝损伤并启动TGF-β/Smad信号传导通路.实验分为TGF-β1shRNA干预组(T);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA干预组(T+R1);TGF-β1shRNA+TβRⅡsiRNA干预组(T+R2);TGF-β1siRNA+TβRⅠshRNA+TβRⅡshRNA干预组(T+R1+R2)和模型对照组(M).观察各实验组血清ALT、AST、HA;肝组织学RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中α-SMA、COL-1、COL-3、TGF-β1、Smad3、PCNA和TGF-αmRNA及蛋白的表达.结果:经shRNA质粒DNA干预的4个治疗组与模型组比较,均能显著降低血清ALT,AST及HA的水平(ALT:592.80±98.4IU/L,440.80±91.9IU/L,461.61±120.0IU/L,284.00±49.0IU/Lvs949.5±196.1IU/L;AST:686.80±112.3IU/L,591.00±99.87IU/L,607.50±84.8IU/L,398.30±61.9IU/Lvs985.67±274.8IU/L;HA:5682.80±824.14μg/L,2871.26±394.68μg/L,3004.29±354.25μg/L,1982.12±402.71μg/Lvs8444.65±812.15μg/L,P<0.05)的测定值;4个治疗组两两比较,T+R1+R2组疗效明显高于其他3组(P<0.01).与模型组比较.shRNA质粒DNA干预能明显抑制TGF-β1,Smad3,α-SMA,COL-1及COL-3的mRNA与蛋白的表达(均P<0.05).其抑制效果以T+R1+R2组最明显.对蛋白水平表达的作用也有相似趋势.结论:针对TGF-βRⅠ及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的siRNA联合治疗对小鼠肝损伤中TGF-β/Smad信号传导通路相关的基因表达的抑制具有协同作用.

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