丙型肝炎病毒包膜蛋白E2抗独特型人源单链可变区抗体的筛选与鉴定

钟彦伟; 成军; 蔡炯; 王刚; 洪源; 王琳; 李莉; 张玲霞; 陈菊梅

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目的:制备抗丙型肝炎病毒(HCV)包膜蛋白E2(E2)的抗独特型单链可变区抗体scFv(抗-IdscFv),为研制HCVE2的抗-IdscFv疫苗奠定基础.方法:采用噬菌体表面展示技术,将抗HCVE2单克隆抗体固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出53个克隆,利用酶联免疫黏附法、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCVE2单克隆抗体结合活性较强的抗独特型抗体单链可变区片段(抗-IdscFv)的阳性克隆,并对HCVE2特异性抗-IdscFv的编码序列进行序列测定分析.结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了12倍.用酶联免疫黏附实验(ELISA)方法测定第五轮筛选后上清液中含有的抗-IdscFv与HCVE2单克隆抗体结合活性.其中有18株克隆ELISA的吸光度(A450nm)值较高(E11A450nm0.928,E14A450nm1.152,E17A450nm1.136,E28A450nm1.163,E53A450nm0.965).对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有5株交叉反应较弱(E11A450nm0.044,E14A450nm0.062,E17A450nm0.166,E28A450nm0.012,E53A450nm0.069),结合2次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(E28)阳性克隆.提取质粒,进行DNA序列测定,DNA大小为768bp.结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得单抗HCVE2的抗-IdscFv,本实验结果为开展用抗-IdscFv防治丙型肝炎的研究创造了条件.

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来源
《世界华人消化杂志》 |2002年第8期|897-901|共5页
作者
钟彦伟; 成军; 蔡炯; 王刚; 洪源; 王琳; 李莉; 张玲霞; 陈菊梅;
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作者单位

中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心;

全军病毒性肝炎防治研究重点实验室;

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正文语种 chi
中图分类 R512.63;R373.21;
关键词
丙型肝炎病毒; 包膜蛋白E2; 筛选; 鉴定; HCV; 抗独特型单链可变区抗体; 噬菌体抗体库技术;

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