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抗菌肽Dermadistinctin串联表达载体的构建及表达产物抗菌活性的鉴定

         

摘要

根据GenBank中Dermadistinctin K(DDK)和Dermadistinctin L(DDL)的氨基酸序列,选择大肠杆菌偏嗜性密码子,采用SOE法合成了DDK和DDL基因。在DDK及DDL基因序列中引入肠激酶裂解位点,并将其依次克隆入pET-32a(+)质粒,构建了串联体融合表达载体P-DDK,并将其转入Rosetta(DE3)中进行融合表达;表达产物在终浓度为0.1 mmol/LIPTG诱导4 h后可达到最大表达量。对重组蛋白DDK进行镍离子亲和层析柱纯化以及肠激酶裂解之后,对酶切产物进行了抑菌活性分析。分析结果表明,抗菌肽DDK与DDL的混合物对金黄色葡萄球菌(CowanⅠ)、大肠杆菌DH5α、致病性大肠杆菌O1、猪霍乱沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌均具有一定的抑菌活性。

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