人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

高云; 黄宇烽; 夏欣一; 马百坤

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人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定

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L PGDS是一种双功能蛋白 ,即催化PGD2产生和运输亲脂疏水分子 .L PGDS主要分布于脑和男性生殖器官 ,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中 .测定体液中L PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等 .在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶 ,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究 .用PCR的方法从质粒pGEX 2T htL PGDS上扩增出人睾丸L PGDS成熟肽基因编码序列 ,经测序证实后 ,将其插入到质粒pPIC9中 ,构建该基因的酵母表达质粒 .电转化毕赤氏酵母GS1 1 5 ,经甲醇诱导后 ,可实现L PGDS的高效、分泌性表达 .镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化 ,SDS PAGE分析证实 ,在 2 7kD处有重组蛋白的表达 ,表达量为 2 7mg L .纯化蛋白可与视黄酸结合。

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来源
《中国生物化学与分子生物学报》 |2003年第6期|757-762|共6页
作者
高云; 黄宇烽; 夏欣一; 马百坤;
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作者单位

南京军区南京总医院生殖遗传研究室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
前列腺素D合成酶; 酵母表达系统; 金属亲合层析; 糖基化;

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