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蛋白酪氨酸磷酸酶shp-1催化活性域的纯化和动力学分析

         

摘要

为了获得分离纯化shp—1催化活性域蛋白(D1C)并估测其动力学常数,试验选择D1C的转化菌株经IVFG诱导表达、菌体裂解缓冲液悬浮和超声波破碎后,通过HPLC分离纯化D1C蛋白,所得产物进行SDS~PAGE电泳检测,然后以pY作为去磷酸化反应的底物,利用孔雀绿显色法,通过双倒数作图法对纯化的D1C蛋白进行动力学分析。结果表明:试验成功地表达了D1C蛋白,其分子质量约为34.6ku,主要以可溶性蛋白的形式表达;通过HPLC技术可有效地对D1C蛋白进行分离纯化;D1C蛋白的米氏常数Km=2.04mmol/L,催化常数(kcat)=44.98s^-1,特异性常数(kcat/Km)=22.05L/(mmol·s)。

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