抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

粘红; 安利国; 赵岩; 陈吉中; 范国才; 王清明

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抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

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构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征。

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来源
《现代免疫学》 |2004年第5期|357-361|共5页
作者
粘红; 安利国; 赵岩; 陈吉中; 范国才; 王清明;
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作者单位

军事医学科学院放射医学研究所;

山东师范大学生命科学院;

吉林大学生命科学学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
肝癌细胞; 单链抗体; scFv; 噬菌体抗体库; 筛选;

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