刚地弓形虫抑制蛋白的原核表达与免疫反应性分析

原飞; 刘转转; 张波; 曹建平; 郑葵阳; 王德广

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目的克隆并表达刚地弓形虫抑制蛋白(Tg PRF)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,根据Tg PRF的基因编码序列设计引物,RT-PCR扩增产物双酶切后连接入p ET30a(+)载体,重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α,经双酶切、PCR和测序鉴定阳性菌落。p ET30a(+)-Tg PRF转化至E.coli BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物。重组蛋白经镍亲和层析法纯化后,以兔抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析r Tg PRF蛋白的免疫反应性。结果 Tg PRF基因RT-PCR扩增产物约为492 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒p ET30a(+)-Tg PRF构建成功。SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约35 000的可溶性重组蛋白。Western blotting结果显示,r Tg PRF蛋白能被兔抗弓形虫血清识别。结论本研究克隆的Tg PRF基因序列能在原核表达系统中表达,且具有免疫反应性。

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来源
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 |2015年第1期|21-24|共4页
作者
原飞; 刘转转; 张波; 曹建平; 郑葵阳; 王德广;
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作者单位

徐州医学院解剖教研室;

徐州医学院感染与免疫实验室;

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所;

卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室;

世界卫生组织疟疾;

血吸虫病和丝虫病合作中心;

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正文语种 chi
中图分类弓形体;
关键词
刚地弓形虫; 抑制蛋白; 基因克隆; 原核表达; 免疫反应性;

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