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水稻细胞质1 ,6-二磷酸果糖酶基因1195 bp的上游调控序列的克隆及其在转基因水稻中的表达研究(英文)

         

摘要

1 ,6_二磷酸果糖酶 (EC3.13.11)催化 1,6_二磷酸果糖分解为 6_磷酸葡萄糖和无机磷酸。在高等植物的光合作用细胞中 ,存在两种 1,6_二磷酸果糖酶 :即叶绿体型 1,6_二磷酸果糖酶和细胞质型 1,6_二磷酸果糖酶。由于细胞质型 1,6_二磷酸果糖酶在植物碳水化合物代谢中起重要作用 ,且具有表达特异性 ,本试验通过GenomeWalking分离了水稻细胞质型 1,6_二磷酸果糖酶基因的上游序列 ,并将其与 β_葡糖醛酸酶 (GUS)报告基因构建成嵌合表达载体。采用基因枪法转化水稻 ,在转基因水稻中分析了GUS的表达活性和特异性。组织化学检测表明 ,在转基因水稻的成熟叶片中 ,GUS基因只在叶肉细胞中表达 ,在表皮细胞、泡状细胞、维管组织中均无表达 ;在叶鞘中的表达与叶片中相似 ,仅仅在叶肉细胞中表达 ;在根、茎所有细胞中均没有蓝色反应。为进一步研究 1,6_二磷酸果糖酶基因启动子在水稻中的表达量 ,对 12株独立来源的转基因水稻的GUS活性进行了荧光定量分析。结果显示 ,水稻成熟叶片中的GUS活性平均值为 70 31.5pmol4_MU-1·min-1·mg蛋白。在不同器官及组织中表达活性有差异 ,在转基因水稻的叶片、叶鞘中GUS均有较强的表达 ,在根、茎中未检测到GUS活性。实验结果表明 ,ATG上游

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