用于病毒拯救的稳定表达琥珀正交系统的细胞系构建及鉴定

龚青; 王相伟; 殷相平; 张杰; 毛箬青; 孙跃峰

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用于病毒拯救的稳定表达琥珀正交系统的细胞系构建及鉴定

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复制缺陷型病毒不能在宿主体内复制,用其制备的疫苗不仅能够诱导宿主体液免疫和细胞免疫应答,还具有较好的安全性。本研究旨在构建一种利用琥珀正交系统制备复制缺陷型病毒的新平台。首先构建携带琥珀终止密码子(TAG)和EGFP报告基因的质粒(pTAG-EGFP),然后以质粒pAcBac1.tR4-MbPyl为模板,利用PCR方法扩增正交氨酰tRNA合成酶/tRNA片段(aaRS/tRNA)并克隆至不同载体中,成功构建了真核表达质粒paaRS/tRNA。将不同组合的质粒paaRS/tRNA和pTAG-EGFP共转染BHK-21细胞,荧光检测表明氨酰tRNA合成酶及tRNA在BHK-21细胞中具有正交性和高度特异性;经G418和嘌呤霉素筛选及Western-blot验证,本研究成功构建了一种稳定表达氨酰tRNA合成酶及tRNA的BHK-21细胞系,为后续拯救TAG突变复制缺陷型病毒提供了强有力的技术平台,也为重大动物疫病复制缺陷型病毒活疫苗研究奠定了基础。

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来源
《中国兽医科学》 |2022年第4期|429-438|共10页
作者
龚青; 王相伟; 殷相平; 张杰; 毛箬青; 孙跃峰;
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作者单位

中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室;

河北科技师范学院动物科技学院河北省预防兽医学重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
非天然氨基酸; 正交系统; 正交氨酰tRNA合成酶/tRNA; 报告基因;

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