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草鱼肠系膜脂肪组织高质量总RNA提取方法的研究

         

摘要

基于传统的酸性酚—异硫氰酸胍—氯仿一步提取法,比较分析多种优化操作步骤,摸索出一种高质量提取体质量为80~150 g草鱼肠系膜脂肪组织总RNA的改良方法.试验结果显示,相较于肝脏、脾脏、肠道等脏器组织,草鱼肠系膜脂肪组织RNA丰度低,且极易在样品前处理阶段出现顽固性降解问题.探索发现,将取样量增至约30 mg,可提升RNA产量以满足常规试验需求.针对降解难题,改良常规的样品前处理技术流程,采用鲜样液氮速冻,冻样直接放入TRIzol试剂中裂解,并即刻进行长时间机械匀浆,时长约3 min等核心操作步骤,可显著降低脂肪组织样品RNA的降解.Agilent生物分析仪检测结果显示,改良方法提取的草鱼肠系膜脂肪组织RNA完整度高,关键RIN值为8.7~9.0.研究推测,长时间机械匀浆所形成的持续剪切冲击力或许有助于TRIzol试剂中的异硫氰酸胍等成分突破油滴阻碍而有效抑制内源性RNA酶.本方法提取的草鱼脂肪组织总RNA质量可满足高通量转录组测序要求.

著录项

  • 来源
    《水产科学》 |2021年第2期|166-171|共6页
  • 作者单位

    中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 广东 广州 510380;

    仲恺农业工程学院 动物科技学院 广东 广州 510225;

    中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 广东 广州 510380;

    中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 广东 广州 510380;

    中国水产科学研究院 珠江水产研究所 农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室 广东 广州 510380;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 水产动物学;
  • 关键词

    草鱼; 脂肪组织; 总RNA; 提取方法;

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