总RNA

摘要： [目的]探索获得高质量、高纯度的甜玉米籽粒总RNA的提取方法。[方法]以授粉后20 d的超甜玉米系SY01籽粒为试验材料,比较了RNAiso法、Trizol法、CTAB法3种方法对甜玉米籽粒总RNA的提取效果,用琼脂糖凝聚电泳、Nanodrop2000、Agilent 2100 Bioanalyzer检测了提取的RNA的完整性、纯度和浓度。[结果]RNAiso法提取的总RNA样品,OD_(260/280)值为2.09,浓度为1 250 ng/μL,RIN值为8.6,条带清晰完整,获得率高,质量好。[结论]RNAiso法适合玉米籽粒总RNA的大量提取,总RNA产物可直接用于Micro RNA和转录组测序等试验。

摘要： 以番茄品种Moneymaker(MM)为材料,比较了试剂盒法、Trizol法和Trizol改良法3种方法对番茄叶片及果实不同时期总RNA的提取效果,分别采用核酸蛋白检测仪及琼脂糖凝胶电泳,测定了提取样本总RNA的浓度、纯度及完整性.结果表明,就番茄叶片而言,3种方法提取的总RNA纯度均较好;其中Trizol改良法是提取番茄叶片总RNA最适宜的方法.对番茄不同时期果实而言,华越洋试剂盒法提取青果期、转色期果实总RNA的效果最好,其浓度最高,且琼脂糖凝胶电泳条带清晰完整、无拖尾现象,但成本最高;而提取成熟期果实RNA的最优方法是Trizol改良法,完整性最好,成本较低.研究为开展后续相关基因表达及功能研究等分子生物学研究提供了技术基础.

摘要： [目的]为了探索更适合鸢尾属植物花朵总RNA的提取方法.[方法]以新鲜的鸢尾(Iris tectorum Maxim.)和冷冻的西南鸢尾(I.bulleyana Dykes)的花蕾为材料,分别采用Trizol法、TransZol Plant试剂盒法和EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法等3种方法提取它们的花蕾总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,利用超微量紫外分光系统检测RNA的纯度和浓度,比较3种不同试剂提取得到的总RNA的质量和浓度.[结果]对于冷冻的西南鸢尾花蕾组织,只有TransZol Plant试剂盒法可以提取出纯度好、浓度高的RNA.而对于新鲜的鸢尾花蕾,3种方法提取出的RNA均可用于后续试验,但质量和浓度有一定差异,EasyPure Plant RNA Kit试剂盒法提取出的RNA质量最好且产量较高;TransZol Plant试剂盒法提取出的RNA质量较好但产量最高;Trizol法提取出的RNA品质较好但产量最低.[结论]综合植物样品材料、RNA纯度和得率及费用等因素,EasyPure Plant RNAKit试剂盒法适合需要获得高质量的RNA和有新鲜的植物材料时使用;TransZol Plant试剂盒法适合在需要大量RNA但对RNA的质量要求不是很高时使用,且较适合应用于冷冻的鸢尾花朵.研究结果为鸢尾属植物的分子生物学深入研究提供一定研究基础,也为其它植物花朵总RNA的提取提供必要的参考.

摘要： 基于传统的酸性酚—异硫氰酸胍—氯仿一步提取法,比较分析多种优化操作步骤,摸索出一种高质量提取体质量为80～150 g草鱼肠系膜脂肪组织总RNA的改良方法.试验结果显示,相较于肝脏、脾脏、肠道等脏器组织,草鱼肠系膜脂肪组织RNA丰度低,且极易在样品前处理阶段出现顽固性降解问题.探索发现,将取样量增至约30 mg,可提升RNA产量以满足常规试验需求.针对降解难题,改良常规的样品前处理技术流程,采用鲜样液氮速冻,冻样直接放入TRIzol试剂中裂解,并即刻进行长时间机械匀浆,时长约3 min等核心操作步骤,可显著降低脂肪组织样品RNA的降解.Agilent生物分析仪检测结果显示,改良方法提取的草鱼肠系膜脂肪组织RNA完整度高,关键RIN值为8.7～9.0.研究推测,长时间机械匀浆所形成的持续剪切冲击力或许有助于TRIzol试剂中的异硫氰酸胍等成分突破油滴阻碍而有效抑制内源性RNA酶.本方法提取的草鱼脂肪组织总RNA质量可满足高通量转录组测序要求.

摘要： 为了从喜马拉雅紫茉莉不同组织中提取高质量的总RNA,本研究以喜马拉雅紫茉莉的根、茎和叶组织为材料,采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB-LiCl法和试剂盒法提取总RNA,使用琼脂糖凝胶电泳和超微量紫外分光光度计检测RNA的完整性、纯度与浓度。结果表明:Trizol法可用于叶组织RNA的提取,但RNA纯度低;改良Trizol法可用于茎和叶组织RNA的提取,RNA完整性较好,有少量的蛋白质、酚类物质和有机溶剂残留,茎和叶组织RNA的浓度分别为385.43 ng/μL、394.54 ng/μL;CTAB-LiCl法提取的根、茎和叶组织总RNA的浓度较低,并且RNA纯度差,A260/A280比值均大于2.0,A260/A230比值均小于2.0,RNA发生严重降解;试剂盒法提取的根、茎和叶组织总RNA完整性好,浓度高分别为:451.92 ng/μL、579.35 ng/μL和664.97 ng/μL,并且RNA纯度高,A260/A280比值均在1.8~2.0,A260/A230比值均大于2.0。因此,Trizol法和CTAB-LiCl法不适用于提取喜马拉雅紫茉莉总RNA,而改良Trizol法和试剂盒法可提取到质量较好的喜马拉雅紫茉莉总RNA。

摘要： 为了从喜马拉雅紫茉莉不同组织中提取高质量的总RNA,本研究以喜马拉雅紫茉莉的根、茎和叶组织为材料,采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB-LiCl法和试剂盒法提取总RNA,使用琼脂糖凝胶电泳和超微量紫外分光光度计检测RNA的完整性、纯度与浓度.结果表明:Trizol法可用于叶组织RNA的提取,但RNA纯度低;改良Trizol法可用于茎和叶组织RNA的提取,RNA完整性较好,有少量的蛋白质、酚类物质和有机溶剂残留,茎和叶组织RNA的浓度分别为385.43 ng/μL、394.54 ng/μL;CTAB-LiCl法提取的根、茎和叶组织总RNA的浓度较低,并且RNA纯度差,A260/A280比值均大于2.0,A260/A230比值均小于2.0,RNA发生严重降解;试剂盒法提取的根、茎和叶组织总RNA完整性好,浓度高分别为:451.92 ng/μL、579.35 ng?μL和664.97 ng/μL,并且RNA纯度高,A260/A280比值均在1.8～2.0,A260/A230比值均大于2.0.因此,Trizol法和CTAB-LiCl法不适用于提取喜马拉雅紫茉莉总RNA,而改良Trizol法和试剂盒法可提取到质量较好的喜马拉雅紫茉莉总RNA.

摘要： 为促进茴香的分子生物学研究,以宁夏海原的茴香叶片为试验材料,分别采用CTAB法、CTAB改良法、CTAB水饱和酚法、Tris-硼酸法、异硫酸氰胍法、异硫酸氰胍改良法、Trizol法和Trizol改良法共8种方法提取茴香叶片RNA,比较其提取效果.结果表明:CTAB改良法提取的RNA质量最好,浓度为1481.9μg·μL-1,OD260/280为1.82,OD260/230为2.12,且得率较高,琼脂糖凝胶电泳显示条带清晰完整、无拖尾现象;Trizol法、Trizol改良法及异硫酸氰胍法提取的RNA质量较高,但完整性较差;CTAB法、CTAB水饱和酚法及异硫酸氰胍改良法提取RNA的效果较差;Tris-硼酸法提取的RNA质量最差.

摘要： 目的:探索提取高质量的辣椒不同组织总RNA的方法,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术验证。方法:以1年生辣椒(Capsicum annuum)的根、下胚轴、茎、叶、顶端分生组织、花和果实为实验材料,比较改良Trizol Reagent试剂法和RNAprep Pure试剂盒法对辣椒组织总RNA的提取效果。以改良Trizol Reagent试剂法提取的辣椒不同组织总RNA为模板,反转录成cDNA的第一条链;通过RT-PCR和qRT-PCR,研究甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的扩增和自我修剪基因(SELF-PRUNING,CaSP)的组织表达。结果:Trizol Reagent提取的总RNA,28 S和18 S条带较亮,OD_(260)/OD_(280)比值为1.82~2.07;RNAprep Pure提取的总RNA,28 S和18 S条带较暗,OD_(260)/OD_(280)比值为1.93~2.15;Trizol Reagent提取的总RNA能扩增出CaGAPDH基因片段,目的基因CaSP在不同组织中表达水平不同,在根和花中表达更高。结论:Trizol Reagent提取的总RNA,完整性和纯度均较好,得率也较高,能满足后续的分子实验要求。Trizol Reagent试剂法是提取高质量辣椒不同组织总RNA的较好方法。

摘要： 在CTAB法的基础上,经过多方面改进,提取了"红阳"猕猴桃7种组织(果实、雄花、雌花、叶片、种子、皮、根)的总RNA.利用琼脂糖凝胶电泳和超微量核酸蛋白测定仪检测了该方法和试剂盒法提取的RNA的完整性、纯度和浓度.结果 显示:采用这两种方法提取到的猕猴桃不同组织的总RNA,能检测到18S和28S两条清晰完整的条带,A260/A280值在1.8～2.0间,A260/A230值大于2.0.进一步的RT-PCR验证结果表明采用这两种方法提取到的RNA质量较高,均达到了分子生物学实验的要求.因此,本文改良的CTAB法适用于猕猴桃各组织高质量总RNA的大量提取.

摘要： 实验采集了6只2岁梅花鹿鹿茸样品,应用异硫氰酸胍法提取其总RNA,建立了最适鹿茸RNA提取条件,实验最终提取RNA的紫外吸收值:A/A=1.73~1.86, A/A=2.16~2.53,经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、 18s、 5s三条带,其亮度满足未降解RNA特征,且无明显DNA污染。

摘要： 实验采集了6只2岁梅花鹿鹿茸样品,应用异硫氰酸胍法提取其总RNA,建立了最适鹿茸RNA提取条件,实验最终提取RNA的紫外吸收值:A/A=1.73~1.86, A/A=2.16~2.53,经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、 18s、 5s三条带,其亮度满足未降解RNA特征,且无明显DNA污染。

摘要： 实验采集了6只2岁梅花鹿鹿茸样品,应用异硫氰酸胍法提取其总RNA,建立了最适鹿茸RNA提取条件,实验最终提取RNA的紫外吸收值:A/A=1.73~1.86, A/A=2.16~2.53,经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、 18s、 5s三条带,其亮度满足未降解RNA特征,且无明显DNA污染。

摘要： 实验采集了6只2岁梅花鹿鹿茸样品,应用异硫氰酸胍法提取其总RNA,建立了最适鹿茸RNA提取条件,实验最终提取RNA的紫外吸收值:A/A=1.73~1.86, A/A=2.16~2.53,经甲醛变性凝胶电泳可以清晰看到28s、 18s、 5s三条带,其亮度满足未降解RNA特征,且无明显DNA污染。

摘要： 本发明公开了一种监控总RNA中线状RNA消除的方法。所述方法包括：人工合成外源线性ERCC‑0004‑RNA和外源环状ERCC‑0013‑RNA；对外源环状ERCC‑0013‑RNA进行质量控制；将外源线性ERCC‑0004‑RNA和外源环状ERCC‑0013‑RNA按等摩尔比混合，得到混合外源RNA；向待检样本的总RNA中加入混合外源RNA，得到第一混合物；去除第一混合物中的核糖体RNA，得到第二混合物；去除第二混合物中的线性RNA，线性RNA包括总RNA中的线性RNA和外源线性ERCC‑0004‑RNA，得到第三混合物；分别检测第一混合物和第三混合物中的外源线性ERCC‑0004‑RNA和外源环状ERCC‑0013‑RNA的含量；根据含量计算总RNA中线性RNA的去除比例。所述方法能够有效监控总RNA中线性RNA的去除程度。

摘要： 本发明公开了一种用SLFN13从总RNA中纯化总MRNA的方法，属于生物技术领域。本发明所述的用SLFN13从总RNA中纯化总mRNA的方法，具体步骤如下：（1）总RNA提取；（2）利用SLFN13对总RNA中的tRNA与rRNA进行酶切；（3）酶切结束后可以直接于70°C加热15分钟将酶灭活，获得纯化的总mRNA。本发明打破传统的RNA纯化观念，引入特异性的RNA内切酶将计划去除的tRNA与rRNA从总RNA中酶切去除，简便高效。具有以下优点：成本低，易获得；操作简便；节约时间；纯化效果好；利于保证mRNA的稳定性。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，涉及一种总核酸、总RNA和基因组DNA的同步提取方法，是将植物材料粉碎后用SDS提取液进行提取，得到粗提物上清液，三等分粗提物上清液后分别用于总核酸、总RNA和基因组DNA的提取。本发明将SDS提取液与其它试剂相结合，可以同步提取总核酸、总RNA和基因组DNA，不仅节约了时间，而且节约了提取成本，可以满足多种分子生物学研究的需要，具有现实意义。

摘要： 本发明公开了一种草鱼肠系膜脂肪组织高质量总RNA的提取方法,包括样品液氮速冻，TRIzol试剂裂解与机械匀浆，离心去除油脂层，氯仿分离含RNA水相，异丙醇沉淀和75％乙醇洗涤等步骤。在样品前处理阶段，本发明通过增加取样量至30mg,可提升产量以满足常规分子生物学实验对RNA量的需求；样品采用液氮速冻,无需人工研磨，并将冻样在TRIzol试剂中进行长时间机械匀浆，时长3min,可显著降低RNA降解发生,同时增加2次离心去除油脂层等操作步骤,获得的总RNA纯度和完整性较高。本发明的提取方法有效解决了草鱼脂肪组织RNA提取易降解，产量低等问题，且操作简单，批处理效果稳定，可满足转录组测序等高质量RNA要求的实验，也适用于其它鱼类脂肪组织总RNA的提取。

摘要： 本发明属于核糖核酸(RNA)技术领域,涉及一种总RNA提取试剂及其制造方法以及提取总RNA的方法。该提取试剂以异硫氰酸胍、盐酸胍两种RNA酶的高效抑制剂为主要原料,以十二烷基肌胺酸钠、十二烷基硫酸钠两种去垢剂,柠檬酸三钠、醋酸钠和冰醋酸提供盐分和调节pH值,以消毒双蒸水和苯酚作为溶剂来制取。用本发明的总RNA提取试剂提取RNA操作过程简单、操作时间短、提取的RNA质量略优于进口的TRIzol试剂,生产成本低。

摘要： 本发明公开了一种去除动物总RNA中的核糖体RNA的方法。本发明提供了一种去除动物总RNA样本中的rRNA的方法，依次包括如下步骤：(1)取动物总RNA样本，进行变性，然后采用特异引物组进行反转录；所述特异引物组由若干条rRNA特异性反转录引物组成；(2)采用RNase H酶进行处理；(3)采用DNase I进行处理；(4)回收RNA。本发明提供的方法具有以下优势：(1)从动物总RNA样本中特异性去除rRNA，保留了其他目标RNA如mRNA、LncRNA等，适宜于LncRNA测序；(2)物种耐受度高，广泛适用于哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类、鱼类及昆虫类等总RNA样本中rRNA的去除；(3)操作简单、成本低廉且适宜于批量自动化工作站操作。

摘要： 本发明公开了一种监控总RNA中线状RNA消除的方法。所述方法包括：人工合成外源线性ERCC-0004-RNA和外源环状ERCC-0013-RNA；对外源环状ERCC-0013-RNA进行质量控制；将外源线性ERCC-0004-RNA和外源环状ERCC-0013-RNA按等摩尔比混合，得到混合外源RNA；向待检样本的总RNA中加入混合外源RNA，得到第一混合物；去除第一混合物中的核糖体RNA，得到第二混合物；去除第二混合物中的线性RNA，线性RNA包括总RNA中的线性RNA和外源线性ERCC-0004-RNA，得到第三混合物；分别检测第一混合物和第三混合物中的外源线性ERCC-0004-RNA和外源环状ERCC-0013-RNA的含量；根据含量计算总RNA中线性RNA的去除比例。所述方法能够有效监控总RNA中线性RNA的去除程度。

摘要： 本发明公开了一种用SLFN13从总RNA中纯化总MRNA的方法，属于生物技术领域。本发明所述的用SLFN13从总RNA中纯化总mRNA的方法，具体步骤如下：（1）总RNA提取；（2）利用SLFN13对总RNA中的tRNA与rRNA进行酶切；（3）酶切结束后可以直接于70°C加热15分钟将酶灭活，获得纯化的总mRNA。本发明打破传统的RNA纯化观念，引入特异性的RNA内切酶将计划去除的tRNA与rRNA从总RNA中酶切去除，简便高效。具有以下优点：成本低，易获得；操作简便；节约时间；纯化效果好；利于保证mRNA的稳定性。

摘要： 本发明属于分子生物学领域，涉及一种总核酸、总RNA和基因组DNA的同步提取方法，是将植物材料粉碎后用SDS提取液进行提取，得到粗提物上清液，三等分粗提物上清液后分别用于总核酸、总RNA和基因组DNA的提取。本发明将SDS提取液与其它试剂相结合，可以同步提取总核酸、总RNA和基因组DNA，不仅节约了时间，而且节约了提取成本，可以满足多种分子生物学研究的需要，具有现实意义。

摘要： 本发明公开了一种从蔷薇属植物组织中提取总RNA的方法。具体地公开了一种从蔷薇属植物组织中提取总RNA的方法，所述方法包括将蔷薇属植物组织经液氮研磨后，进行连续三次裂解和提取的步骤，所述三次裂解和提取分别采用溶液A、溶液B和溶液C进行裂解，并公开了溶液A、溶液B和溶液C的组分。本发明方法有效解决了次生代谢物质、蛋白质、和DNA等对RNA提取的干扰问题，显著提高了蔷薇属植物组织总RNA的提取质量和效率。本发明方法具有高效率、高质量、低成本、周期短、稳定好、操作简单和易于广泛应用等优点，提取的总RNA完整性好、纯度高、得率高，可直接用于RT‑PCR、cDNA文库构建等下游分子生物学实验。