亮氨酸氨肽酶LapA在无孢黑曲霉中的重组表达优化及酶学性质

林晓彤; 董良波; 郑俊威; 王斌; 潘力

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亮氨酸氨肽酶LapA在无孢黑曲霉中的重组表达优化及酶学性质

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针对目前国产食品级亮氨酸氨肽酶的工业生产产量不高的现状,将米曲霉、黑曲霉和酱油曲霉的5 个亮氨酸氨肽酶基因(lapA、laplO、lap2、laplS、laplN)在低蛋白背景的无孢黑曲霉HL-1中进行重组表达,通过信号肽替换对其编码区进行改造,利用杂合启动子PnaⅡ及营养缺陷标记pyrG构建表达载体,并基于规律间隔成簇短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas9工具设计亮氨酸氨肽酶的基因组定点整合策略,获得高活力的亮氨酸氨肽酶表达菌株,重组菌株LapA-C的亮氨酸氨肽酶活力达到11701.2U/mL,比未利用CRISPR工具的LapA-T重组表达菌株的酶活力(2476.0U/mL)提高了约3.7倍.此外,通过融合6XHis标签实现了重组亮氨酸氨肽酶LapA的纯化,并对其进行了酶学性质研究:蛋白质大小约为35.0kDa,重组亮氨酸氨肽酶LapA最适pH值为8.5,最适温度为65°C.综上所述,本研究基于CRISPR策略成功实现了亮氨酸氨肽酶在黑曲霉中的高效重组表达.

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来源
《食品科学》 |2021年第2期|90-96|共7页
作者
林晓彤; 董良波; 郑俊威; 王斌; 潘力;
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作者单位

华南理工大学生物科学与工程学院广东广州 510006;

华南理工大学生物科学与工程学院广东广州 510006;

华南理工大学生物科学与工程学院广东广州 510006;

华南理工大学生物科学与工程学院广东广州 510006;

广东省发酵与酶工程重点实验室广东广州 510006;

华南理工大学生物科学与工程学院广东广州 510006;

广东省发酵与酶工程重点实验室广东广州 510006;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类酶制剂（酵素）;
关键词
亮氨酸氨肽酶; 黑曲霉; 高效表达; 酶学性质;

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