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鲑鱼甲病毒 E1基因高保守区融合表达及免疫特性的分析

         
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根据 GenBank 中公布的鲑鱼甲病毒（salmonid alphavirus， SAV）SAV 1、 SAV 2和 SAV3三个基因型中 E1基因，选择高保守序列702 bp（436－1137）合成基因，命名为 SAV E1，将其克隆到原核表达载体 pCold TF 中构建重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞 BL21中，经终浓度为1．0 mmol／L 的 IPTG 诱导表达， SDS－PAGE 和 Western blot 鉴定，重组蛋白均获得了表达，表达 E1重组蛋白约95 kD。用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白，制备抗血清。间接 ELISA 结果显示，鼠抗重组蛋白 E1血清效价为1∶25600；间接免疫荧光结果显示，鼠抗重组 E1蛋白血清可与 SAV 发生特异反应，由此表明表达的 E1重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，为 SAV 检测方法的建立提供理论依据。%Highly conservative sequence of salmonid alphavirus E 1 gene (702 bp) was synthesized according to sequences of E1 gene of SAV1, SAV2 and SAV3 published in GenBank.It was cloned into prokaryotic expression vector pCold TF to construct recombinant plasmid.The recombinant plasmid was transformed into E .coli BL21 cells.The expression of re-combinant plasmid pCold TF in E.coli BL21 was induced using IPTG at 1.0 mmol /L.The target protein of 95 kD was ob-tained and confirmed by SDS-PAGE and Western blot.The recombinant protein was purified by nickelionaffinity chroma -tography, and antiserum was produced.Indirect ElISA showed the antiserum against E 1protein had OD values at least twice that obtained for the negative control serum at a dilution of 1∶25 600.IFA showed the antiserum against E1 protein reacted specifically with SAV.The results indicated that the recombinant E1 protein was immunogenical and antigenical , which established a foundation for further study on detection method of SAV .

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