检测冰冻肝组织切片中丙型肝炎病毒RNA的一种快速和高度特异性方法

C.Sergi; T.Goeser; G.Otto; H.F.Otto; W.J.Hofmann; 杨燕

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目的:建立一种简单适用的以多聚酶链式反应(PCR)为基础的方法,以便快速、高度特异性地从单份冰冻组织切片提取的RNA中检测HCV核酸。方法:对18例施行原位肝移植患者的肝组织进行HCV RNA的检测,其中9名患者有HCV抗原血症(EIA-2,RIBA-2)和病毒血症(PCR),另9名正常。从每名患者标本的组织切片(1～10μm)中抽提出总RNA,一部分采用常规的逆转录套式PCR(RT-nestded PCR)进行检测,包括引物特异的逆转录和套式RCR,两对寡核苷酸引物来自于HCV RNA 5′端非编码区。另一部分采用组合RT-nested PCR检测,即逆转录与第一次PCR在同一离心管中进行,整个过程只需5小时。管中用以隔开逆转录酶(RTase)与Taq DNA聚合酶的石蜡界面可有可无。验证试验采用斑点印迹杂交,能够与地高辛(DIG)标记的寡核苷酸探针进行杂交的标本为HCV阳性。结果:运用常规的分步RT-PCR与组合RT-PCR两种检测方法,发现9例HCV阳性患者其肝组织中HCV RNA为阳性,9例外周血中HCV阴性患者其肝组织中HCV RNA亦为阴性。少至500ng的肝组织总RNA作为模板也能产生在EB染色的琼脂糖凝胶上可检测到的cDNA扩增产物。DIG标记的Alx-89寡核苷酸探针仅与HCV RNA阳性标本杂交。结论:组合RT-PCR能够在一种通用缓冲体系中一步完成逆转录和第一次PCR,高度特异性地直接检测肝组?

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来源
《肿瘤学与转化医学（英文）》 |1997年第1期|14-17|共4页
作者
C.Sergi; T.Goeser; G.Otto; H.F.Otto; W.J.Hofmann; 杨燕;
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作者单位

Dept.of Pathology.University of Heidelberg;

Im Neuenheimer Feld 220/221;

D-69120 Heidelberg;

Germany;

同济医科大学附属同济医院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类肠道病毒与肝炎病毒;肝及肝管;
关键词
肝移植; 肝组织切片; 丙型肝炎病毒; RNA;

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