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Ⅰ群禽腺病毒五邻体基因的克隆及原核表达

         

摘要

根据GenBank中Ⅰ群禽腺病毒(AAV)基因组序列,设计了1对特异性引物.以CELO毒株基凶组DNA为模板,通过PCR扩增出结构蛋白五邻体基因(penton),将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ位点,构建了原核表达载体pGEX-penton.将其转化到感受态细胞DH5α中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,获得了45.9 ku的融合蛋白.用不同的IPTG浓度和时间诱导表达,得出诱导的最佳IPTG浓度为1.5 mmol/L,最佳时间为4 h.用尿素提取包涵体表达产物,得到penton纯化蛋白,浓度为2.98 mg/mL.经Western-bolt分析,该蛋白具有良好的反应原性.

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