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首页> 中文期刊> 《广东医学》 >氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立

氯化钴诱导体外人髓核细胞缺氧模型的建立

         
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目的观察氯化钴(CoCl_(2))对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型。方法利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L CoCl_(2)溶液分别处理12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终13个分组:空白对照组,CoCl_(2)处理组(100μmol/L-12 h组,100μmol/L-24 h组,100μmol/L-36 h组,100μmol/L-48 h组;200μmol/L-12 h组,200μmol/L-24 h组,200μmol/L-36 h组,200μmol/L-48 h组;300μmol/L-12 h组,300μmol/L-24 h组,300μmol/L-36 h组,300μmol/L-48 h组)。利用CCK-8实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况,并通过免疫印迹(western blot)及实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果与空白对照组比较,CoCl_(2)处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低(P<0.05),但在低浓度、短时间的CoCl_(2)诱导下,髓核细胞的生存率反而提高(P<0.05)。HIF-1α与VEGF的mRNA及蛋白表达亦随CoCl_(2)浓度升高和时间延长而增加(P<0.05)。但在300μmol/L CoCl_(2)的诱导下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期。结论CoCl_(2)对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关,总体成逐渐升高趋势。本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法,可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考。

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