重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达

马伟峰; 胡厚稳; 杨飞华; 蔡绍晖

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目的制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况.方法以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5′端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN.荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况.结果构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN.结论成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础.

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来源
《广东医学》 |2012年第8期|1097-1100|共4页
作者
马伟峰; 胡厚稳; 杨飞华; 蔡绍晖;
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作者单位

南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广州,510515;

温州医学院药学院,浙江温州,325035;

南方医科大学公共卫生与热带医学学院,广州,510515;

暨南大学药学院,广州,510632;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
基质细胞衍生因子; 饰胶蛋白聚糖; 腺病毒载体;

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